¿Cómo funcionan las pruebas de resistencia genética del VIH?

Incluso para las personas con una adherencia óptima a la terapia, se espera que se desarrolle cierto grado de resistencia a los medicamentos contra el VIH con el tiempo debido a las mutaciones naturales del virus. En otros casos, la resistencia puede desarrollarse rápidamente cuando la adherencia subóptima permite que las poblaciones de VIH resistentes prosperen, lo que eventualmente lleva al fracaso del tratamiento.

Cuando se produce un fracaso del tratamiento, deben seleccionarse combinaciones alternativas de medicamentos para suprimir esta nueva población de virus resistentes. Pruebas de resistencia genetica ayuda a facilitar esto al identificar los tipos de mutaciones resistentes en el "grupo viral" de una persona, al tiempo que se determina qué tan susceptibles son esos virus a los posibles agentes antirretrovirales.

Se utilizan dos herramientas principales para las pruebas de resistencia genética en el VIH: la Ensayo genotípico del VIH y el Ensayo fenotípico del VIH.

¿Qué es un genotipo y un fenotipo?

Por definición, un genotipo es simplemente la composición genética de un organismo, mientras que un fenotipo son las características o rasgos observables de ese organismo.

Los ensayos genotípicos (o genotipado) funcionan al identificar las instrucciones heredadas dentro de la codificación genética o ADN de una célula. Los ensayos fenotípicos (o fenotipado) confirman la expresión de esas instrucciones bajo la influencia de diferentes condiciones ambientales.

Si bien la asociación entre genotipo y fenotipo no es absoluta, la genotipificación a menudo puede predecir el fenotipo, particularmente cuando los cambios en el código genético confieren cambios esperados en rasgos o características, como en el caso del desarrollo de resistencia a fármacos.

La fenotipificación, por otro lado, confirma el "aquí y ahora". Su objetivo es evaluar la reacción de un organismo a cambios específicos en la presión ambiental, como cuando el VIH está expuesto a diferentes medicamentos y / o concentraciones de fármacos.

Explicando el genotipo del VIH

La genotipificación del VIH es generalmente la tecnología más común utilizada para las pruebas de resistencia. El objetivo del ensayo es detectar mutaciones genéticas específicas en el gag-pol región del virus ' genoma (o código genético). Esta es la región donde las enzimas transcriptasa inversa, proteasa e integrasa, los objetivos de la mayoría de los medicamentos antirretrovirales, están codificadas en la cadena de ADN.

Al amplificar primero el genoma del VIH utilizando la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), los técnicos de laboratorio pueden secuenciar (o "mapear") la genética del virus utilizando diversas tecnologías de detección de mutaciones.

Estas mutaciones (o acumulación de mutaciones) son interpretadas por técnicos que analizan la relación entre las mutaciones identificadas y la susceptibilidad esperada del virus a diferentes fármacos antirretrovirales. Las bases de datos en línea pueden ayudar comparando la secuencia de prueba con la de un prototipo de virus "de tipo salvaje" (es decir, el VIH que no contiene mutaciones resistentes).

La interpretación de estas pruebas se utiliza para determinar la susceptibilidad al fármaco, y el mayor número de mutaciones clave confiere a niveles más altos de resistencia al fármaco.

Explicando el VIH Phenoytyping

La fenotipificación del VIH evalúa el crecimiento del VIH de una persona en presencia de un medicamento, luego lo compara con el crecimiento de un virus de tipo salvaje de control en el mismo medicamento.

Al igual que con los ensayos genotípicos, las pruebas fenotípicas amplifican la región gag-pol del genoma del VIH. Esta sección del código genético se "injerta" en un clon de tipo salvaje utilizando tecnologia de ADN recombinante. El virus recombinante resultante se usa para infectar células de mamíferos in vitro (en el laboratorio).

La muestra viral se expone luego a concentraciones crecientes de diferentes fármacos antirretrovirales hasta que se logre una supresión viral del 50% y del 90%. Las concentraciones se comparan con los resultados del control, muestra de tipo salvaje.

Los cambios relativos de "pliegue" proporcionan el rango de valores por el cual se determina la susceptibilidad del medicamento. Un cambio cuádruple simplemente significa que se necesitaba cuatro veces la cantidad de fármaco para lograr la supresión viral en comparación con la del tipo salvaje. Cuanto mayor sea el valor del pliegue, menos susceptible será el virus a un medicamento específico.

Luego, estos valores se colocan dentro de los rangos clínico inferior y superior, y los valores superiores confieren niveles más altos de resistencia al fármaco. (Ver informe de muestra).

¿Cuándo se realiza una prueba de resistencia genética?

En los EE. UU., Las pruebas de resistencia genética se realizan tradicionalmente en pacientes sin tratamiento previo para determinar si tienen alguna resistencia farmacológica "adquirida". Los estudios en los EE. UU. Sugieren que entre el 6% y el 16% del virus transmitido será resistente a al menos un fármaco antirretroviral, mientras que casi el 5% será resistente a más de una clase de fármaco.

Las pruebas de resistencia genética también se usan cuando se sospecha resistencia a los medicamentos en individuos en terapia. La prueba se realiza mientras el paciente toma el régimen fallido o dentro de las cuatro semanas posteriores a la interrupción del tratamiento si la carga viral es superior a 500 copias / ml. Las pruebas genotípicas generalmente se prefieren en estos casos ya que cuestan menos, tienen un tiempo de respuesta más rápido y ofrecen una mayor sensibilidad para detectar mezclas de virus de tipo salvaje y resistentes.

En general, se prefiere una combinación de pruebas fenotípicas y genotípicas para personas con resistencia compleja a múltiples fármacos, en particular para las personas expuestas a los inhibidores de la proteasa.